polimeraznaya tsepnaya reaktsiya (pcr)

PPT 20 стр. 650,5 КБ Бесплатная загрузка

20 стр.

FaylHub.uz

Скачать через Telegram

Размер 650,5 КБ

Тип файла PPT

Страницы 20

Обновлено Дек 2025

Предварительный просмотр (5 стр.)

Прокрутите вниз 👇

1 / 20

противовирусный иммунитет молекулярно-генетические методы диагностики полимеразную цепную реакцию (пцр, pcr) изобрел в 1983 году американский ученый кэри мюллис (kary mullis). принцип метода заключается в удвоении (амплификации) участка днк, ограниченного праймерами, при помощи фермента днк-полимеразы. за каждый следующий цикл амплификации происходит удвоение как исходного участка днк, так и вновь синтезированных фрагментов (амплификатов). в результате этого число фрагментов растет в геометрической прогрессии (цепная реакция). после 30 - 40 циклов их число превышает несколько миллиардов, что делает возможным их обнаружение различными методами. амплификация (лат. amplificatio — усиление, увеличение), в молекулярной биологии — увеличение числа копий днк. в клетке амплификация происходит в результате репликации днк, в искусственных условиях увеличения числа копий днк добиваются с помощью полимеразной цепной реакции. праймер — короткая олиго- или полинуклеотидная последовательность со свободной з’он-группой, комплементарно связанная с однонитевой днк или рнк; с его 3’-конца днк-полимераза начинает наращивать полидезоксирибонуклеотидную цепь. этапы пцр-исследования 1. выделение нуклеиновых кислот. на первом этапе выделяется вся …

2 / 20

в геометрической прогрессии. 3. учет результатов. накопленные продуты амплификации (большое число копий днк между местами посадки праймеров) можно выявить путем электрофореза в геле. помимо этого, при использовании флуоресцентно меченых зондов, возможен учет результатов по изменению флуоресценции относительно отрицательного контроля. компоненты реакции для проведения пцр в простейшем случае требуются следующие компоненты: днк-матрица, содержащая тот участок днк, который требуется амплифицировать. два праймера, комплементарные противоположным концам разных цепей требуемого фрагмента днк. термостабильная днк-полимераза — фермент, который катализирует реакцию полимеризации днк. полимераза для использования в пцр должна сохранять активность при высокой температуре длительное время, поэтому используют ферменты, выделенные из термофилов — thermus aquaticus (taq-полимераза), pyrococcus furiosus (pfu-полимераза), pyrococcus woesei (pwo-полимераза) и другие. дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (datp, dgtp, dctp, dttp). ионы mg2+, необходимые для работы полимеразы. буферный раствор, обеспечивающий необходимые условия реакции — рн, ионную силу раствора. содержит соли, бычий сывороточный альбумин. для того, чтобы выявить и размножить в имеющейся пробе именно ту последовательность днк, которая необходима, …

3 / 20

атура отжига зависит от состава праймеров и обычно выбирается на 4—5°с ниже их температуры плавления. время стадии — 0,5—2 мин. неправильный выбор температуры отжига приводит либо к плохому связыванию праймеров с матрицей (при завышенной температуре), либо к связыванию в неверном месте и появлению неспецифических продуктов (при заниженной температуре). главный элемент pcr - это многократный тепловой цикл, при котором образец днк подвергается воздействию трёх различных температур. третья стадия - элонгация полимераза - это фермент, умеющий достраивать вторую цепь днк. для того, чтобы начать это делать, ей нужен кусочек, где днк уже двуцепочечная, в этом качестве и выступает место взаимодействия днк с праймером. полимераза всегда достраивает цепь от 5' к 3'-концу (эти названия связаны с ориентацией сахара дезоксирибозы в цепи; в обычной двуцепочечной днк цепи направлены противоположно друг другу: 5'_____________3' 3'_____________5' часто используемые полимеразы taq и pfu наиболее активны при 72 °c теперь в растворе есть четыре слишком длинных цепи днк. две …

4 / 20

ным количеством размноженных нужных участков, кусочков днк раствор наносят на гель, к гелю прикладывают напряжение. за часок-другой кусочки молекул днк (они имеют заряд) перемещаются в геле на расстояние, пропорциональное их массе. гель кладут под ультрафиолет и масса одинаковых кусочков днк начинает светиться в том месте геля, где собралась. если собралась — значит в днк был участок, соответствующий праймеру, нужный «ген». если ничего не светится, мутная полоска без четкого участка — значит, нужного участка в днк нет. четвертая стадия - детекция. схема удвоения фрагментов днк в пцр (andy vierstraete, 2001) схема удвоения фрагментов днк в пцр для процесса амплификации необходимо, чтобы структура праймеров была идентична (комплементарна) участку исходной днк. если этого не происходит (отсутствует специфическая днк), то удвоения днк не происходит. если в растворе не окажется ни одной молекулы днк с участком, комплементарным внесенным праймерам, то реакция пцр не пойдет, даже несмотря на то, что в растворе будет плавать миллион других …

5 / 20

шинства современных тест-систем составляет от 10 до 100 копий днк. это значительно превышает чувствительность культуральных методов исследования. 4. малый объем биологического материала. проведение анализа возможно в минимальном объеме пробы (до нескольких микролитров), что крайне важно в педиатрии, неонатологии, неврологии, судебной медицине. 5. возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций.особенно эффективен метод пцр для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и персистирующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях. недостатки метода пцр 1. амплифицируется днк как живого, так и погибшего микроорганизма.это налагает определенные требования при использовании пцр для контроля эффективности лечения. в общем случае подобный контроль должен проводиться спустя промежуток времени, втечение которого происходит полная элиминация возбудителя. однако, метод nasba выявляет рнк только живых микроорганизмов и позволяет избежать этих ограничений. 2. высокая чувствительность. ряд микроорганизмов (условно - патогенная флора, упф) в норме может существовать у человека в малом количестве. при помощи метода пцр определяются даже самые …

Хотите читать дальше?

Скачайте все 20 страниц бесплатно через Telegram.

Скачать полный файл

О "polimeraznaya tsepnaya reaktsiya (pcr)"

противовирусный иммунитет молекулярно-генетические методы диагностики полимеразную цепную реакцию (пцр, pcr) изобрел в 1983 году американский ученый кэри мюллис (kary mullis). принцип метода заключается в удвоении (амплификации) участка днк, ограниченного праймерами, при помощи фермента днк-полимеразы. за каждый следующий цикл амплификации происходит удвоение как исходного участка днк, так и вновь синтезированных фрагментов (амплификатов). в результате этого число фрагментов растет в геометрической прогрессии (цепная реакция). после 30 - 40 циклов их число превышает несколько миллиардов, что делает возможным их обнаружение различными методами. амплификация (лат. amplificatio — усиление, увеличение), в молекулярной биологии — увеличение числа копий днк. в клетке амплификация происходит в ре...

Этот файл содержит 20 стр. в формате PPT (650,5 КБ). Чтобы скачать "polimeraznaya tsepnaya reaktsiya (pcr)", нажмите кнопку Telegram слева.

Теги: polimeraznaya tsepnaya reaktsiy… PPT 20 стр. Бесплатная загрузка Telegram