днк-полимераза ҳалқали реакция ёрдамида (пцr) аниқлаш

DOCX 3 sahifa 33,5 KB Bepul yuklash

3 sahifa

FaylHub.uz

Telegram orqali yuklab olish

Hajm 33,5 KB

Fayl turi DOCX

Sahifalar 3

Yangilangan Dek 2025

Sahifa ko'rinishi (3 sahifa)

Pastga aylantiring 👇

1 / 3

днк-полимераза ҳалқали реакция ёрдамида (пцr) аниқлаш керакли реактивлар: 3,8% ли натрий цитрат, днк ажратиш учун диатомтм дна преп 200 реагентлар тўплами («изоген лабораторияси»), пзр ўтказиш учун генепактм пзр cоре лиофилизатсияланган реагентлар тўплами, “синтол” фирмасининг реал вақтдаги пзр ўтказиш учун реагентлар тўплами, агароза, бромфенол-кўки, этидиум бромид, маркер (100 ж.н., синтол), тбе буфер учун трис, бор кислотаси ва эдта, 70% ва 96% ли этил спирти, дн2о. асбоб ва жиҳозлар: 1. пзр- амплификатор– applied biosystems 9700; 2. реал вақтдаги(real-time pcr) пзр-амплификатор– applied biosystems 7500, aqsh 2. трансиллюминатор– wisedoc, koreya; 3. центрифуга– eppendorf 5417c, germaniya; 4. vorteks –flv-2400n, combi-spin, biosan; 5. электрофорез ускуналари– helicon; 6. энергия манбаи– elf-4, dnk-texnologiya, rossiya; 7. электрон тарози– denver instrument, apx-203; 8. дициллятор– thermo scientific, aqsh; 9.эппендорф пробиркалари 1 мл, 0,2 мл; 10. микротўлқинли печ; 11. микропипеткалар – labpette; 12. совутгич ва музлатгич – 4 0c, - 20 0c li; 13. термостат – termit, dnk-texnologiya; 14.кимёвий идишлар. ажратилган днк …

2 / 3

1. мастер микс пробиркаларини (+), (-) тарзида белгиланди – назорат ва текширилаётган намуна. 1. ҳамма пробиркаларга – назорат ва текширилаётган намуналарга пцр эритмасидан (дилуент) 10 мкл солинди. пробиркадаги аралашмани атайлаб эритиш шарт эмас. 1. ҳамма пробиркаларга 2,5 мкл дан праймерлар солинди. праймерлар консентрацияси 0,1-0,5 мкм. 1. мастер микс пробиркаларига 5 мкл дан днк солинди. (-) назоратга бидицилланган сув солинди. 1. пробиркаларни оғзини ёпган ҳолда пцр-амплификаторига қўйилди ва тегишли амплификатсия дастури танланди. амлификатсия пцр- амплификатор (апплиед биосйцемс 9700) ускунасида ўтказилди. cyp21генини амплификатсия қилиш учун ишлатилган праймерлар: forward (u1-f) 5’-gagtaccttggagggcctgct-3’; reverse (f3-r) 3’-gctacactccagcgtctgagg-5’. пцр-амплификацияни ўтказишда қуйидаги дастур ёрдамида олиб борилди. пцр-амплификатсиясини ўтказиш дастури босқич ҳарорат,°c вақт,мин цикл денатуратция 95.0 4:00 1 94.0 0:20 45 ренатуратция 64.0 0:40 елонгатция 72.0 3:00 якунловчи элонгатция 72.0 5:00 1 амплификатция тугагандан сўнг, ҳамма пробиркаларни электрофорез хонасига кўчирилди ва 5-10 мкл пцр маҳсулоти 1,2 % электрофорез усули билан аниқланди. реал вақтдаги (реал-тиме пцр) пцр-амплификатсиясини ўтказиш тбгп билан …

3 / 3

бўлиши натижасида юзага келадиган мутатсия) – мутатсия +318х бўлиб, аминокислоталарнинг ўрин алмашишидан келиб чиқадиган мутатция ҳисобланади. шундай қилиб, cyp21 генининг пцр маҳсулотлари реал вақтдаги пцр-амплификатцияда ўтказилиб, натижада аниқ натижалар олинади. бу метод 5'-экзонуклеаза полимераза фаоллигига асосланган. реактсион аралашмада муҳим компонент ҳисобланган днк зондлар ўзида 5' ҳолатдаги флуорецсент бўёқ ва 3' ҳолатдаги флуорецсентсияни ўчирувчи (масалан, fam _tgatcgggtggagtcctgcc_bh1зондини оладиган бўлсак, бу ерда фам - флуорецсент бўёқ бўлса, бh1 эса флуорецсентсияни ўчирувчидир, улар орасида маълум бир нуклеотидлар кетма-кетлиги жойлашган) каби қисмлардан иборат ҳамда фосфат гуруҳ 3' ҳолатда жойлашган бўлади. бу зондлар амплификатцияланаётган соҳада комплиментарлик асосида жойлашади. флуорецсент ўчирувчи флуорецсент бўёқ томонидан ажралаётган ёруғликни ютади, фосфат гуруҳи эса 3' ҳолатдаги полимеразани блоклайди. агар wт аралашмаси бўлган намунада фам флюорецсент бўёғини ошиши кузатилса c1994т мутатцияси намоён бўлмайди. гетерозигота мутатцияни мавжудлигида эса бир вақтнинг ўзида wилд тйпе ва мутант аралашмаларидаги намуналарда флоурессентсия бўёқ – фамни кўпайиши кузатилади. фақат мутант аралашмасидаги намуналарда флюрецсентсия бўёқ – фамни кўпайиши …

Ko'proq o'qimoqchimisiz?

Barcha 3 sahifani Telegram orqali bepul yuklab oling.

To'liq faylni yuklab olish

"днк-полимераза ҳалқали реакция ёрдамида (пцr) аниқлаш" haqida

днк-полимераза ҳалқали реакция ёрдамида (пцr) аниқлаш керакли реактивлар: 3,8% ли натрий цитрат, днк ажратиш учун диатомтм дна преп 200 реагентлар тўплами («изоген лабораторияси»), пзр ўтказиш учун генепактм пзр cоре лиофилизатсияланган реагентлар тўплами, “синтол” фирмасининг реал вақтдаги пзр ўтказиш учун реагентлар тўплами, агароза, бромфенол-кўки, этидиум бромид, маркер (100 ж.н., синтол), тбе буфер учун трис, бор кислотаси ва эдта, 70% ва 96% ли этил спирти, дн2о. асбоб ва жиҳозлар: 1. пзр- амплификатор– applied biosystems 9700; 2. реал вақтдаги(real-time pcr) пзр-амплификатор– applied biosystems 7500, aqsh 2. трансиллюминатор– wisedoc, koreya; 3. центрифуга– eppendorf 5417c, germaniya; 4. vorteks –flv-2400n, combi-spin, biosan; 5. электрофорез ускуналари– helicon; 6. энергия манбаи– ...

Bu fayl DOCX formatida 3 sahifadan iborat (33,5 KB). "днк-полимераза ҳалқали реакция ёрдамида (пцr) аниқлаш"ni yuklab olish uchun chap tomondagi Telegram tugmasini bosing.

Teglar: днк-полимераза ҳалқали реакция … DOCX 3 sahifa Bepul yuklash Telegram