dnk-polimeraza halqali reaktsiya yordamida (ptsr) aniqlash

DOC 3 sahifa 58,5 KB Bepul yuklash

3 sahifa

FaylHub.uz

Telegram orqali yuklab olish

Hajm 58,5 KB

Fayl turi DOC

Sahifalar 3

Yangilangan Dek 2025

Sahifa ko'rinishi (3 sahifa)

Pastga aylantiring 👇

1 / 3

dnk-polimeraza halqali reaktsiya yordamida (ptsr) aniqlash kerakli reaktivlar: 3,8% li natriy tsitrat, dnk ajratish uchun diatomtm dna prep 200 reagentlar to'plami («izogen laboratoriyasi»), pzr o'tkazish uchun genepaktm pzr core liofilizatsiyalangan reagentlar to'plami, “sintol” firmasining real vaqtdagi pzr o'tkazish uchun reagentlar to'plami, agaroza, bromfenol-ko'ki, etidium bromid, marker (100 j.n., sintol), tbe bufer uchun tris, bor kislotasi va edta, 70% va 96% li etil spirti, dn2o. asbob va jihozlar: 1. pzr- amplifikator– applied biosystems 9700; 2. real vaqtdagi(real-time pcr) pzr-amplifikator– applied biosystems 7500, aqsh 2. transillyuminator– wisedoc, koreya; 3. tsentrifuga– eppendorf 5417c, germaniya; 4. vorteks –flv-2400n, combi-spin, biosan; 5. elektroforez uskunalari– helicon; 6. energiya manbai– elf-4, dnk-texnologiya, rossiya; 7. elektron tarozi– denver instrument, apx-203; 8. ditsillyator– thermo scientific, aqsh; 9.eppendorf probirkalari 1 ml, 0,2 ml; 10. mikroto'lqinli pech; 11. mikropipetkalar – labpette; 12. sovutgich va muzlatgich – 4 0c, - 20 0c li; 13. termostat – termit, dnk-texnologiya; 14.kimyoviy idishlar. ajratilgan dnk …

2 / 3

zishdan oldin muzlatgichdan kerakli miqdorda master miks probirkalari olindi. 2. master miks probirkalarini (+), (-) tarzida belgilandi – nazorat va tekshirilayotgan namuna. 3. hamma probirkalarga – nazorat va tekshirilayotgan namunalarga ptsr eritmasidan (diluent) 10 mkl solindi. probirkadagi aralashmani ataylab eritish shart emas. 4. hamma probirkalarga 2,5 mkl dan praymerlar solindi. praymerlar konsentratsiyasi 0,1-0,5 mkm. 5. master miks probirkalariga 5 mkl dan dnk solindi. (-) nazoratga biditsillangan suv solindi. 6. probirkalarni og'zini yopgan holda ptsr-amplifikatoriga qo'yildi va tegishli amplifikatsiya dasturi tanlandi. amlifikatsiya ptsr- amplifikator (applied biosytsems 9700) uskunasida o'tkazildi. cyp21genini amplifikatsiya qilish uchun ishlatilgan praymerlar: forward (u1-f) 5’-gagtaccttggagggcctgct-3’; reverse (f3-r) 3’-gctacactccagcgtctgagg-5’. ptsr-amplifikatsiyani o'tkazishda quyidagi dastur yordamida olib borildi. ptsr-amplifikatsiyasini o'tkazish dasturi bosqich harorat,°c vaqt,min tsikl denaturattsiya 95.0 4:00 1 94.0 0:20 45 renaturattsiya 64.0 0:40 elongattsiya 72.0 3:00 yakunlovchi elongattsiya 72.0 5:00 1 amplifikattsiya tugagandan so'ng, hamma probirkalarni elektroforez xonasiga ko'chirildi va 5-10 mkl ptsr mahsuloti 1,2 % elektroforez usuli bilan …

3 / 3

bo'lgan dnk da tekshirilgan va ulardan bittasida mutattsiya topildi: u nonsens (nukleotidlar ketma-ketligi almashishi natijasida aminokislotalar o'zgarishidan yoki stop kodon paydo bo'lishi natijasida yuzaga keladigan mutatsiya) – mutatsiya +318x bo'lib, aminokislotalarning o'rin almashishidan kelib chiqadigan mutattsiya hisoblanadi. shunday qilib, cyp21 genining ptsr mahsulotlari real vaqtdagi ptsr-amplifikattsiyada o'tkazilib, natijada aniq natijalar olinadi. bu metod 5'-ekzonukleaza polimeraza faolligiga asoslangan. reaktsion aralashmada muhim komponent hisoblangan dnk zondlar o'zida 5' holatdagi fluoretssent bo'yoq va 3' holatdagi fluoretssentsiyani o'chiruvchi (masalan, fam _tgatcgggtggagtcctgcc_bh1zondini oladigan bo'lsak, bu erda fam - fluoretssent bo'yoq bo'lsa, bh1 esa fluoretssentsiyani o'chiruvchidir, ular orasida ma'lum bir nukleotidlar ketma-ketligi joylashgan) kabi qismlardan iborat hamda fosfat guruh 3' holatda joylashgan bo'ladi. bu zondlar amplifikattsiyalanayotgan sohada komplimentarlik asosida joylashadi. fluoretssent o'chiruvchi fluoretssent bo'yoq tomonidan ajralayotgan yorug'likni yutadi, fosfat guruhi esa 3' holatdagi polimerazani bloklaydi. agar wt aralashmasi bo'lgan namunada fam flyuoretssent bo'yog'ini oshishi kuzatilsa c1994t mutattsiyasi namoyon bo'lmaydi. geterozigota mutattsiyani mavjudligida esa bir vaqtning o'zida …

Ko'proq o'qimoqchimisiz?

Barcha 3 sahifani Telegram orqali bepul yuklab oling.

To'liq faylni yuklab olish

"dnk-polimeraza halqali reaktsiya yordamida (ptsr) aniqlash" haqida

dnk-polimeraza halqali reaktsiya yordamida (ptsr) aniqlash kerakli reaktivlar: 3,8% li natriy tsitrat, dnk ajratish uchun diatomtm dna prep 200 reagentlar to'plami («izogen laboratoriyasi»), pzr o'tkazish uchun genepaktm pzr core liofilizatsiyalangan reagentlar to'plami, “sintol” firmasining real vaqtdagi pzr o'tkazish uchun reagentlar to'plami, agaroza, bromfenol-ko'ki, etidium bromid, marker (100 j.n., sintol), tbe bufer uchun tris, bor kislotasi va edta, 70% va 96% li etil spirti, dn2o. asbob va jihozlar: 1. pzr- amplifikator– applied biosystems 9700; 2. real vaqtdagi(real-time pcr) pzr-amplifikator– applied biosystems 7500, aqsh 2. transillyuminator– wisedoc, koreya; 3. tsentrifuga– eppendorf 5417c, germaniya; 4. vorteks –flv-2400n, combi-spin, biosan; 5. elektroforez uskunalari– helic...

Bu fayl DOC formatida 3 sahifadan iborat (58,5 KB). "dnk-polimeraza halqali reaktsiya yordamida (ptsr) aniqlash"ni yuklab olish uchun chap tomondagi Telegram tugmasini bosing.

Teglar: dnk-polimeraza halqali reaktsiy… DOC 3 sahifa Bepul yuklash Telegram